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生物**水平	II
生物	智人
源器官	乳腺
生長特性	追隨者
形態學	鵝卵石或主軸形
推薦播種密度	將全部內容物解凍成根據傳播說明書中指定的適當的T25燒瓶。
標記	在DCFI-1中生長時，K5，K14，波形蛋白，E-鈣粘蛋白，p63，K8，K18，K19，CD29，CD49f a-SMA，CD10，Thy-1
應用	僅供研究使用
永生化方法	用攜帶hTERT基因的重組慢病毒進行連續傳代和轉導
描述	永生化的人類乳腺祖細胞--HTERT（K5 + / K19 +）是共表達正常乳腺和干細胞標記物的祖細胞的克隆細胞群。它具有自我更新和分化成管腔和/或肌上皮細胞譜系的能力。通過在不同優化培養基中的繁殖，細胞能夠產生具有不同形態和特征的新種群的細胞，如粘蛋白-1陽性細胞，波形蛋白陰性細胞，或表達基底，管腔和其他干細胞標記物。醛脫氫酶1A3酶的表達明顯較高，通常用于分離正常和腫瘤乳腺干細胞。K5 + / K19 +細胞具有Wnt，Notch和hedeghog基因調控途徑。
程序概述
圖片
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傳播	使用PriCoat?T25燒瓶（G299）或應用細胞細胞外基質（G422）是細胞粘附到培養容器所必需的。在以下條件下培養含有ECM的培養容器中的細胞。為了制備DFCI-1，基礎培養基是可從ABM（TM018和TM004）獲得的Prigrow VIII和Prigrow IV（1：1，vol / vol）培養基。為了制備完成的生長培養基，*終濃度為0.01M HEPES（Gibco; 15630），1％胎牛血清（TM999），12.5ng / ml（EGF）表皮生長因子（Z100135） ，6.5ng / ml三碘甲狀腺原氨酸（Sigma; T5516），0.545ng / mlβ-雌二醇（Sigma; E2257），1μg/ ml胰島素（Z101065），1μg/ ml氫化可的松（Sigma; I5500），0.006X乙醇胺; E9508），14.1μg/ ml磷酸乙醇胺（Sigma; P0503），10μg/ ml轉鐵蛋白（Sigma; T2252），2mM谷氨酰胺（Gibco; 250微克/毫升亞硒酸鈉（Sigma; S1382），1ng / mg霍亂毒素（Sigma; C8052），35μg/ ml牛垂體提取物（Hammond Cell Tech），1％青霉素/鏈霉素（G255）或10μg/ ml慶大霉素（Gibco; 15750-060）和10μg/ ml抗壞血酸（Sigma; A4034）。調節至pH 7.4。氣氛：空氣：93.5％，CO 2：6.5％; 溫度：37.0℃。 優化培養基： 用一些肌上皮細胞標記（a-SMA，CD10，Thy-1）表達基底細胞，管腔和干細胞標記物，在DFCI-1中培養細胞。 對于細胞在緊密上皮細胞集落周圍采用紡錘形狀形態，粘蛋白-1陽性細胞的存在在補充有B27（10ml / 500ml培養基）的乳腺上皮生長培養基（MEGM; Lonza CC-3151），20ng / ml（EGF）表皮生長因子（Z100135），20ng / ml FGF2（Z101455），4μg/ ml肝素，和青霉素/鏈霉素（G255）。氣氛：空氣：93.5％，CO 2：6.5％; 溫度：37.0℃。 對于腔分化和肌上皮分化的缺失以及粘蛋白-1陽性和波形蛋白陰性細胞的出現，在DCFI-2培養基中生長細胞，其中堿為α-MEM和Prigrow IV（1：1，體積/體積）介質可從ABM（TM004）獲得。補充，0.01M HEPES（Gibco; 15630），12.5ng / ml（EGF）表皮生長因子（Z100135），6.5ng / ml三碘甲狀腺原氨酸（Sigma; T5516），0.545ng / mlβ-雌二醇（Sigma; E2257） 1μg/ ml胰島素（Z101065），1μg/ ml氫化可的松（Sigma; I5500），0.006X乙醇胺（Sigma; E9508），14.1μg/ ml磷酸乙醇胺（Sigma; P0503），10μg/ ml轉鐵蛋白（Sigma; T2252） ，2mM谷氨酰胺（Gibco; 25030-081），2.6ng / ml亞硒酸鈉（Sigma; S1382），1ng / mg霍亂毒素（Sigma; C8052），0。05％牛血清白蛋白（BSA），1％青霉素/鏈霉素（G255）或10μg/ ml慶大霉素（Gibco; 15750-060）和10μg/ ml抗壞血酸（Sigma; A4034）。調節至pH 7.4。氣氛：空氣：93.5％，CO 2：6.5％; 溫度：37.0℃。
保存	1.冷凍培養基：具有20％FBS和10％DMSO的完全生長培養基。2.儲存溫度：液氮氣相。
質量控制	1）Western印跡以評估細胞譜系相關和干細胞標記物; 2）譜系標記的免疫熒光染色分析; 3）用于基因調控途徑的基因表達譜
放棄	1.該產品的CoA（根據要求提供）僅通過RT-PCR驗證細胞型特異性基因表達。CoA中提供的所有測試參數均使用abm的標準化培養系統和程序進行。所述值可能在*終用戶的文化條件下不同。請通過參考已發表的論文或訂購RNA（0.5μg，Cat。＃C207，$ 450.00）或細胞裂解液（100μg，Cat。＃C206，$ 600.00）來驗證該產品是否適合您的研究，以進行初步實驗，或者使用我們的基因表達測定服務（Cat＃C138）。所有銷售都是*終的。 2.我們強烈推薦活細胞出貨以方便細胞轉移，訂購時可以要求提供此選項。請注意，*終用戶需要考慮到*終目的地的溫度變化及其地理位置來評估活細胞裝運的可行性。此外，我們徹底測試我們的細胞系凍融恢復。如果收集冷凍細胞，并且在實驗室中沒有在**的指定條件下（使用推薦的培養容器，培養基，附加補充劑和大氣條件）回收細胞，則可能需要花費（加運費）進行活細胞更換。 所有abm的細胞生物學產品僅供研究使用，不適用于治療/診斷應用。abm對于在治療/診斷應用中使用其細胞生物學產品引起的任何影響不承擔任何責任。有關詳細信息，請聯系技術服務代表。 4.本網站對信息的準確性不作任何保證或聲明。文獻引用僅供參考。abm不保證此類信息已被證明是準確的。
公司簡介	合肥星肽生物科技有限公司作為專業的ABM中國代理商，專業經營原裝進口胎牛血清，細胞因子，ELISA試劑盒，細胞，抗體，生物試劑，耗材，培養基，一抗，二抗等.ABM安徽代理的產品涉及分子生物學，細胞生物學，細菌學，遺傳學，免疫學，生物化學，蛋白質學，細胞治療，臨床應用等領域。合肥星肽生物科技有限公司始終致力于為客戶提供可靠的研究材料以及方便快捷的服務，對購買項目的前期資料提供，中期合同保證，后期貨物跟蹤到*終售后的確保項目準確到位，都有相關專業人士進行維護，確保您在合肥合肥星肽生物科技有限公司公司獲得*上等服務！
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